摘要：貴州是我國主要油茶種植省份之一,油茶種植爆發(fā)病蟲害導致產量與質量急劇下降,其中軟腐病最為顯著。本文以油茶軟腐病中的粉芽孢桿菌為例,結合實時熒光PCR和巢式PCR技術,檢測油茶軟腐病病原菌。熒光PCR檢測過程為:設計反應程序與標準曲線,確定引物濃度、Mg2+濃度,將油茶軟腐病病原菌DNA作模板,通過特異性引物對L1/L2實現(xiàn)PCR擴增;在克隆質粒和病原菌XJ8-3-3懸液兩種模板中,對比實時熒光PCR和普通PCR的靈敏度;向健康植株葉片注射軟腐病粉芽孢桿菌懸液,培養(yǎng)5 d后,采集患病油茶植株根部、球莖等部位檢測軟腐病病原菌含量。巢式PCR檢測病原菌過程為:菌株活化放置PDA平板培養(yǎng)兩天并采集病原菌絲;根據(jù)油茶軟腐病的ITS序列和GenBank中,近似種的ITS序列差異設計B1與B2兩種特異性引物,經(jīng)過預變性、變性等步驟完成擴增,擴增產物用于凝膠檢測。檢測結果如下:(1)兩種模板環(huán)境下,實時熒光PCR檢測靈敏度優(yōu)于普通PCR技術100倍,葉柄組織的根部軟腐病病原菌含量最少;(2)引物B1與B2檢測油茶軟腐病病菌得到405 bp左右的條帶擴增產物,測序結果顯示發(fā)病菌株的堿基序列和粉芽孢桿菌序列吻合。結果顯示,兩種PCR技術均可檢測油茶軟腐病病原中的粉芽孢桿菌,為防治油茶軟腐病提供科學依據(jù)。